目前,检测转印到WB膜上蛋白的技术众多包括荧光标记、银染和化学发光法等;可是,每一种技术都有其局限,人们一直致力于寻找提高WBs定量准确度和动态检测范围的技术方法。这里,介绍一种新的在SpectraMax i3或Paradigm多功能酶标仪上检测WBs膜的蛋白分析方法,Scanlater Western Blot卡盒使在酶标仪上进行蛋白质免疫印迹成像检测成为可能。膜上使用铕元素-螯合物或链霉素标记二抗特异结合被研究的蛋白。铕元素标记具有长荧光寿命周期,可至1ms级别,所以荧光的检测采用时间分辨的模式,从而可以减少来自于自发荧光和其他短寿命周期的杂光的背景。WBs膜被置于酶标仪内,然后使用TRF卡盒进行WBs膜优化扫描,此方法不涉及酶的检测加之铕元素-螯合物标记物具有很强的光漂白抗性,因而信号十分稳定能至几周到几个月。这就允许对膜进行重复扫描以及可能进行不同条带的强度对比以及根据标品进行更精确的定量。TRF检测方式采用单光子计数模式,所以理论的动态检测范围为>105;实际应用中,动态检测范围则受限于高含量条带的荧光饱和以及非特异性结合造成的背景因素。由于不使用CCD,所以此方法不会出现高光溢出现象,而这是化学发光和普通荧光检测的常见问题,所以能够提供非常锐利的条带和出色的图像质量。这一新颖的多功能酶标仪检测平台上的Scanlater Western Blot检测系统以其操作简便、检测灵敏和信号的超高稳定性,提供了出色的WBs检测性能表现,必将多功能酶标仪在实验室应用方面带来又一重大突破!
应用模块:
标配Scanlater卡盒、一块膜适配器、软件分析插件,
该卡盒需放入Molecular Devices公司SpectraMax® i3X 或Paradigm多功能酶标仪进行使用
2、背景消除:铕元素时间分辨荧光标记,具有超长荧光寿命,至1ms级,使用TRF检测模 式能够极大地降低自发荧光和其他来源的背景噪声
3、节省时间:无需进行ECL般的耗时优化过程
4、降低成本: 不再需要成本高昂的X-射线胶片和显影剂
5、即插即用:可随时在SpectraMax® i3 或 SpectraMax Paradigm多功能酶标仪上进行高性能 WB检测,极大地扩展了其在实验室研究方面的应用